高压蒸汽灭菌法是人们在日常生活中经常会使用的，也是最有效一种消毒方法。使用这种方法需要营造一个高压高温的环境。要求器械产生的蒸气压力不低于205.8kPa，高压环境的温度可以达１００摄氏度以上并且在此状态之下能够维持１０－２０分钟就可达到对物品进行灭菌的目的。基本上在日常生活之中凡是耐高温和潮湿的物品，如衣服、纱布、玻璃器材、培养基等都可用这种方法进行灭菌。
一般来说，高压蒸汽灭菌的方法就是将待灭菌的物品直接放置在一个密闭的器材之中，通过加热周边的水，来提高环境温度，使灭菌器材套间的水沸腾,待水蒸汽急剧升腾，就将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，等到仪表盘上的压力值显示为零的时候，关闭排气阀，继续进行加热。此时由于蒸汽没有办法溢出，所以灭菌器内的压力被强行增加，从而使水的沸点增高，由此就能得到高于100℃的温度。在这样高温高压的条件下就能够实现对物品的灭菌消毒。
现在市面上有专用的高温蒸汽灭菌器械，但是仍然有一些注意事项。首先在器械内，待灭菌的物品放置应该有一定的空隙。其次在消毒的操作中，必须将冷空气充分排干净，而且必须等灭菌器材内压力恢复正常之后再开盖，否则就会有器材破裂的风险。最后，为了确保灭菌效果，一定要定期检查灭菌效果，一般器材购买都会赠送试纸，来帮助用户检查消毒效果。
